Materiale og metode
Afprøvningen omfatter resultaterne fra insemineringer fra avl- og opformeringsbesætninger. Insemineringerne blev gennemført med anvendelse af Yorkshiresæd fra 6 seks DanAvls KS-stationer. Sæd fra sædopsamlingerne anvendt i afprøvningen blev undersøgt for bevægelighed af sædcellerne.
Orner og sædopsamlinger
Afprøvningen omfattede sæd fra 568 sædopsamlinger fra 228 Yorkshire orner fra seks forskellige KS-stationer. Fra 193 af ornerne blev anvendt sæd i avls- eller opformeringsbesætninger, hvorfra frugtbarhedsdata blev udtrukket til analyse. Ornerne var godkendte KS-orner [1] og blev sædopsamlet 1-2 gange ugentligt.
Fra hver af sædopsamlingerne blev der udtaget en sæddose til analyse. Sæddosen blev efter produktionen nedkølet til 17 grader og holdt ved 17 grader indtil analyse af sædens bevægelighed. Sædcellernes bevægelse blev analyseret med SpermVision på 3. dagen efter sædopsamlingen [3]. Sæden fra de resterende doser blev anvendt i avls- of opformeringsbesætninger i Danmark. Frugtbarhedsdata fra løbninger foretaget med de resterende sæddoser blev registreret i DanAvls avlsdatabase, hvorfra registreringer om faring og kuldstørrelse blev udtrukket.
[PageBreak]
Søer i afprøvningen
Der blev gennemført løbninger i avls- eller opformeringsbesætninger med sæd fra 382 af sædopsamlingerne fordelt på 193 orner. Løbningerne blev gennemført på både Landrace og Yorkshire søer, hvor cirka 31 procent var 1. kulds søer. Samlet blev gennemført 2.020 løbninger i avls- og opformeringsbesætninger. Løbningerne blev gennemført fra 0 til 6 dage efter produktion af sæddoserne, hvor 97 pct. af løbningerne var gennemført senest på 3. dagen efter produktion af sæddoserne. Løbningerne resulterede i 1.595 kuld.
Til analyse af sammenhæng mellem en enkelt måling af sæd fra en orne til samtlige løbninger fra pågældende orne indgik alle 193 orner. Fra de 193 orner i afprøvningen er samlet gennemført 38.249 løbninger i DanAvls avl- og opformeringsbesætninger. Disse har resulteret i 29.653 faringer.
Analyse for bevægeligheden af sædcellerne
Sæden i sæddosen blev opblandet grundigt ved at vende dosen 10 gange. Herefter blev 10 ml sæd overført til 10 ml NUNC-rør, hvorefter NUNC-røret blev placeret i 38 grader varmt vandbad i 50 minutter til varmereaktivering af sæden. Efter varmereaktivering blev sæden blandet grundigt inden der blev udtaget 2,3 µl sæd som blev overført til 20 µm dybt Leja-4 tællekammer. Sædens bevægelighed blev analyseret i 15 forskellige punkter i tællekammeret [3]. Hver sædcelles bevægelse blev analyseret for bevægelseshastighed og bevægelsesmønster (tabel 1). Alle analyser blev gennemført som dobbeltbestemmelser.
Registrering af kuldstørrelse og faringsprocent
For hver sædopsamling blev registreret insemineringsdato og faringsdato for de sæddoser, der blev anvendt i avls- eller opformeringsbesætninger. Søer, der ikke havde faret fem måneder efter inseminering, blev registreret som manglende faring. For søer, der farede, blev registreret faringsdato, kuldstørrelse målt som totaltfødte grise pr. kuld (FGK).
Statistik
Alle statistiske analyser blev gennemført med anvendelse af med SAS version 9.1.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Der blev i analyser anvendt signifikansgrænse på 5 pct.
Statistisk analyse af sædens bevægelighed
Sædceller med AOC > 5 blev karakteriseret som bevægelige. For bevægelige sædceller blev der for hver analysere beregnet median variationen mellem sædcellerne. Variationen blev estimeret ved forskellen mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne henholdsvis benævnt ”R-” foran variablen (tabel 1 og figur 1).
[PageBreak]
Tabel 1. Definition af afhængige variable i den statistiske analyse
| Parametre analyseret for hver sædcelle |
| AOC |
Average Orientation Change angiver gennemsnitlig drejning af sædcellens hoved. |
| VCL |
Velocity Curved Line angiver sædcellens direkte svømmehastighed i analysen (figur 1). VCL for en analyse er angivet som medianen for pågældende analyse. VCL angives i µm/sekund. |
| VAP |
Velocity Average Path angiver sædcellens gennemsnitlige svømmehastighed som udglattet linie (figur 1). VAP for en analyse er angivet som medianen for pågældende analyse. VAP angives i µm/sekund |
| VSL |
Velocity Straigh Line angiver hastigheden for sædcellens bevægelse fra startpunktet til slutpunktet i analysen (figur 1). VSL for en analyse er angivet som medianen for pågældende analyse. VSL angives i µm/sekund. |
| ALH |
”Amplitude of Latarad Head displacement” angiver den gennemsnitligt amplitude i sædcellehovedets bevægelse (VCL) i forhold til sædcellehovedets gennemsnitlige svømmeretning (VAP). ALH angives i µm. |
| BCF |
Beat Cross Frequency angiver frekvensen af hvor mange gange pr. sekund sædcellen slår med hovedet. BCF angives som frekvens (Hz). |
| Afledte variable |
MOT
(Andelen af bevægelige sædceller) |
Alle sædceller med AOC > 5 grader er bevægelige. Kun bevægelige sædceller er medtaget i analyser af sæd-cellernes hastighed og bevægelsesmønster. Andelen af bevægelige sædceller angives i procent. |
| R-VCL |
Anvendes som mål for variationen mellem sædceller i en analyse. R-VCL er range mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne. R-VCL angives i µm/sekund. |
| R-VAP |
Anvendes som mål for variationen mellem sædceller i en analyse. R-VCL er range mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne. R-VAP angives i µm/sekund. |
| R-VSL |
Anvendes som mål for variationen mellem sædceller i en analyse. R-VCL er range mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne. R-VSL angives i µm/sekund. |
| R-ALH |
Anvendes som mål for variationen mellem sædceller i en analyse. R-VCL er range mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne. R-ALH angives i µm. |
| R-BCF |
Anvendes som mål for variationen mellem sædceller i en analyse. R-VCL er range mellem 25 pct. og 75 pct. kvartilerne. R-BCF angives som frekvens (Hz) |
| LIN |
Linearity angiver forholdet mellem VSL og VCL og udtrykker om sædcellen har en lige bevægelse eller svøm-mer i ring. LIN er et forholdstal uden benævnelse. |
| STR |
Straightness angiver forholdet mellem VSL og VAP og udtrykker om sædcellen har en lige fremadrettet bevæ-gelse. STR er et forholdstal uden benævnelse. |
| WOB |
Wobble angiver forholdet mellem VCL og VAP og angiver hvor meget sædcellen bevæger sig fra sin gennem-snitlige svømmeretning og er udtryk for hvor meget sædcellen svinger med hovedet mens den svømmer. WOB er et forholdstal uden benævnelse. |
Figur 1: Angivelse af parametrene VCL, VAP, VSL samt ALH
for analyserne af sædcellens bevægelse. (Billednr. 1960)
Forskelle i sædbevægelighed mellem sædopsamlinger fra samme orne
Forskelle i sædcellers bevægelighed mellem sædopsamlinger fra samme orne blev undersøgt for orner, der havde mindst tre sædopsamlinger i afprøvningen.
Fra disse orner blev de tre første sædopsamlinger anvendt i analysen.
Sammenhængen mellem sædopsamlinger fra samme orne blev analyseret med mixed model med backwards selection og resulterede i følgende model:
Yijk= μ + ui+ wj + eijk
Yijk er den afhængige variabel.
μ angiver det generelle gennemsnit for den afhængige variabel
ui (i = 1-101) angiver tilfældig variation fra ornen.
wj (j = 1 – 3) angiver tilfældig variation fra sædopsamlingen
eijk er residualvariationen (antages normalt fordelt).
Repeterbarheden for analyse af sædcellernes bevægelighed blev vurderet for de afhængige variable (MOT og R-VCL) som blev fundet havende statistisk sikker sammenhæng til kuldstørrelse eller faringsprocent. Repeterbarheden blev estimeret som 95 pct. konfidensinterval beregnet som 1,96 x spredningen estimeret ud fra residualvariationen.
Sammenhæng mellem sædcellers bevægelighed og frugtbarhed af sæden
Sammenhængen mellem sædcellers bevægelighed og sædens frugtbarhed blev analyseret for alle insemineringer foretaget med sæd, som blev undersøgt for sædbevægelighed. Statistisk model for sammenhæng mellem antal grise pr. kuld (FGK) og sædens bevægelsesparametre blev analyseret med mixed model med backwards selection og kan beskrives ved følgende model:
Yik= μ + Ai + B + C + wk + eik
Yik er den afhængige variabel.
μ angiver det generelle gennemsnit for kuldstørrelsen
Ai (i = 1-4) angiver soens kuld nr., hvor 4 er 4. kuld eller ældre
B angiver andelen af bevægelige sædceller (MOT)
C angiver R-VCL
wk angiver tilfældig variation mellem sædopsamlinger
eik er residualvariationen (antages normalt fordelt).
Sammenhængen mellem faringsprocent og sædens bevægelsesparametre blev analyseret ved anvendelse af logistisk regression med backwards selection og resulterede i følgende model:
ln(pij/(1-pij)) = μ + Ai +βBj + wj
p angiver sandsynligheden for faring
μ angiver det generelle gennemsnit for kuldstørrelsen
Ai (i = 1-2) angiver sædens alder hvor 1 er sæd der er anvendt på dag 0 eller 1; 2 er sæd som er anvendt dag 2 eller senere.
B angiver andelen af bevægelige sædceller (MOT).
wj angiver overspredning mellem løbninger med sæd fra samme sædopsamling, denne antages normal fordelt.
Sammenhæng mellem sædbevægelighed fra en enkelt sædopsamling til ornens gennemsnitlige frugtbarhed
I analysen blev inkluderet sædundersøgelse af første sædopsamling i afprøvningen. Alle insemineringer foretaget med sæd fra orner i afprøvningen blev inkluderet. Sammenhængen mellem sædcellernes bevægelsesparametre og kuldstørrelsen blev analyseret med mixed model med backwards selection og resulterede i følgende model:
Yijfk= μ + Ai + Bj + Cf + D + E + wk + eik
Yijfk er den afhængige variabel.
μ angiver det generelle gennemsnit for kuldstørrelsen.
Ai (i = 1 - 4) angiver soens kuld nr., hvor 4 er 4. kuld eller ældre.
Bj (j = 1,2) angiver sædens alder, hvor 2 er sæd der er 2 dage gammel eller ældre.
Cf angiver soens race (Landrace eller Yorkshire).
D angiver andelen af bevægelige sædceller (MOT).
E angiver R-VCL
wk angiver tilfældig variation mellem sædopsamlinger fra samme orne
eijfk er residualvariationen (antages normalt fordelt).
Analyse af sammenhæng mellem faringsprocent og sædens bevægelsesparametre blev analyseret med logistisk regression med backwards selection og resulterede i følgende model:
ln(pijk/(1-pijk)) = μ + Ai + Bj + C*β
p angiver sandsynligheden for faring
μ angiver det generelle gennemsnit for kuldstørrelsen
Ai (i = 1-2) angiver sædens alder hvor 1 er sæd der er anvendt på dag 0 eller 1; 2 er sæd som er anvendt dag 2 eller senere.
Bj (j=1-4) angiver soens alder i kuld, hvor 4 angiver 4. kuld eller ældre.
C angiver ornens alder relativt fra indsættelse på KS-station, hvor dato for 1. sædopsamling angives som 0.
