Målemetoder

Ketolac

Ketolac måler forekomsten af BHB i mælk kvantitativt. Der tilsættes mælk til måleområdet, så dette er helt dækket af mælk. Sticken holdes stille i tre sekunder, hvorefter mælken rystes af. En eventuel farveændring på sticken aflæses efter præcis 60 sekunder [11]. Måleområdet på Ketolac-sticken indeholder et enzym, β-hydroxy-dehydrogenase, som ved tilstedeværelse af BHB, producerer co-enzymet, NADH. Ligeledes indeholder stickens måleområde nitroblå tetrazolium, som af NADH omdannes til en lilla farve – se figur 1. Jo mørkere lilla, jo højere koncentration af BHB i mælken. Farveskalaen, på røret, angiver koncentrationer af BHB på 0, 50, 100, 200, 500 og 1000 µmol/L mælk [11]. For let at kunne sammenligne resultaterne i nærværende meddelelse, refereres koncentrationsmålingerne for Ketolac fremover i mmol/L (mM). Ketolacrørene skal opbevares på køl. Omkring 15 minutter før brug tages de ud af køleskabet, så sticksene har stuetemperatur ved brug [11].

 
Figur 1. Rør og stick til måling af ketonstoffet, BHB, i mælk. Ved at sammenligne den farve sticken får,
efter endt måling,  med farvekoderne på røret, kan man se, hvilken BHB-koncentration mælken indeholder

PRECISION XCEED

Figur 2. MediSence Precision
Xceed fra Abott Lboratories A/S.
Et lille apparat, der blandt andet
er designet til at kunne måle
koncentrationen af ketonstoffer
i humant blod [4]

MediSence Precision Xceed (Abott Laboratories A/S) er et lille apparat, der vejer 79 gram og måler 9,9 x 5,6 x 2,2 cm. Det er blandt andet designet til at måle forekomsten af ketonstoffer i humant blod, og måler koncentrationen af BHB kvantitativt i området 0,0–8,0 mM. Overstiger koncentrationen 8,0 mM, vises blot bogstaverne ”HI” (high) i displayet [4].

Der tilsættes en dråbe blod til teststrippens måleområde (”sample chamber”, jf. figur 3).

Når ketonstofferne (BHB) fra blodet får kontakt til teststrip’en, sker der en kemisk reaktion, hvorved der frigives nogle elektroner, som transporteres til elektroden inde i apparatet. Hermed genereres en svag strøm, som er proportional med koncentrationen af BHB i blodet [2]. Selve analysen varer cirka 10 sekunder.

Figur 3. Teststrip’en, som sættes ind i MediSence
Precision Xceed, og derefter tilføres en dråbe blod
til måleområdet – her kaldet sample chamber [2]

Teststrip’en (figur 3) indeholder forskellige elektroder.

Den elektriske strøm mellem ”trigger elektroden” og referenceelektroden skal detekteres af apparatet, før målingen kan begynde. Det tilførte blod skal altså flyde forbi referencen og de målende elektroder for at opnå kontakt til ”triggeren”, før en måling kan finde sted.

”Triggeren” er designet til at skulle minimere risikoen for de fejl, der skyldes utilstrækkelig mængde tilført blod. Når der tilsættes tilstrækkeligt med blod (1,5 μL, hvilket svarer til en stor bloddråbe), påbegyndes målingen automatisk [2].

Precision Xceed måler BHB-koncentrationen i plasma [2]. Et tidligere humant valideringsstudie, udført af forhandleren, har testet Precision Xceed op mod hæmatokritniveauer på 30, 35, 40, 45, 55 og 60 pct. Studiet viste, at resultatet i gennemsnit afveg med 0,06 mM fra standardmålingen. Studiet konkluderede, at testen giver et klinisk brugbart resultat indenfor en hæmatokritramme på 30-60 pct. [2] – indenfor hvilken søers hæmatokritniveau også ligger [14]. Samme studie foretog en vurdering af, hvorvidt rystelser under analysen betød noget for resultatet. Afvigelsen her var på 0,01 mM, og betydningen af rystelser var dermed ikke statistisk signifikant [2].

Precision Xceed, der er et apparat udviklet til sukkersygepatienter, er i denne undersøgelse valideret med henblik på måling af ketonstoffer i blodet hos søer. Apparatet er let anvendeligt i praksis, og vil derfor være et velegnet redskab til overvågning af ketose i sobesætningerne.

RANDOX RANBUT

Måling af BHB i serum eller plasma anses for at være den gyldne standardmetode for diagnosticering af subklinisk ketose [7]. Randox Ranbut er en enzymatisk metode, som måler niveauet af D-3-hydroxybutyrat i serum eller plasma. Metoden baseres på oxidation af D-3-hydroxybutyrat (BHB) til acetoacetate ved hjælp af enzymet 3-Hydroxybutyrate dehydrogenase. Oxidation af BHB er koblet til reduktion af NAD+ til NADH (se figur 4), og omfanget af denne reaktion kan direkte sammenholdes med koncentrationen af BHB [6]. Ifølge producenten har Ranbut en høj linearitet, er yderst sensitiv (til 0,1 mmol/l) og stabil [6]. Denne metode benyttes rutinemæssigt til diagnosticering af subklinisk ketose på blandt andet Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet, Aarhus Universitet og vil derfor fungere som kontrolmåling for Precision Xceed i denne undersøgelse.

 
Figur 4. Princippet bag den enzymatiske målemetode, Randox Ranbut [5]